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相差显微镜与微分干涉显微镜有什么不一样

文章出处:网责任编辑:作者:人气:-发表时间:2018-10-08 11:22:00
    相差显微镜与微分干涉差显微镜是属于怎样的显微镜呢,二者是一样的吗?其检测的区别又是怎样的,下面沃德普仪器就给大家介绍一下相差显微镜与微分干涉差显微镜。
 
    在相差成像中,图片的密度区别源于光通过样品时的路程长短不一。灰背景正相差下,那些较厚的区域(光程长)在视野中呈现较周围暗的效果;相对的,较薄的样品或折射率低于周围介质的样品在视野下则要亮些。
DIC 与相差成像技术的最根本区别体现在它的光学基础上。通过比较可知,这两种“对比增强型”成像效果区别明显,但同时又有很多相似之处。
  
    在DIC 成像技术中,情况又有些不同。DIC 成像时,决定对比度的首要因素是光通路中的梯度变化(即光波传播方向上的变化率)。梯度大的区域在视野下对比度高,并呈现出“伪立体”效果——这是DIC 的特征效果;而梯度较小的区域,如扁平的上皮细胞,则不会有很明显的对比度呈现,而且灰度值通常与背景相同。
 
    DIC显微镜的物理原理完全不同于相差显微镜,技术设计要复杂得多。DIC利用的是偏振光,有四个特殊的光学组件:偏振器(polarizer)、DIC棱镜、DIC滑行器和检偏器。偏振器直接装在聚光系统的前面,使光线发生线性偏振。在聚光器中则安装了石英棱镜,即DIC棱镜,此棱镜可将一束光分解成偏振方向不同的两束光(x和y),二者成一小夹角。聚光器将两束光调整成与显微镜光轴平行的方向。最初两束光相位一致,在穿过标本相邻的区域后,由于标本的厚度和折射率不同,引起了两束光发生了光程差。在物镜的后焦面处安装了第二个棱镜,即DIC滑行器,它把两束光波合并成一束。这时两束光的偏振面(x和y)仍然存在。最后光束穿过第二个偏振装置,即检偏器。
 
    在光束形成目镜DIC影像之前,检偏器与偏光器的方向成直角。检偏器将两束垂直的光波组合成具有相同偏振面的两束光,从而使二者发生干涉。x和y波的光程差决定着透光的多少。光程差值为0时,没有光穿过检偏器;光程差值等于波长一半时,穿过的光达到最大值。于是在灰色的背景上,标本结构呈现出亮暗差。为了使影像的反差达到最佳状态,可通过调节DIC滑行器的纵行微调来改变光程差,光程差可改变影像的亮度。调节DIC滑行器可使标本的细微结构呈现出正或负的投影形象,通常是一侧亮,而另一侧暗,这便造成了标本的人为三维立体感,类似大理石上的浮雕。
 
    相差是指同一光线经过折射率不同的介质其相位发生变化并产生的差异。相位指在某一时间上,光的波动所达到的位置。一般由于被检物体所能产生的相差太小,肉眼很难分辨,只有在变相差为振幅差(明暗差)之后才能被区分。相差决定于光波所通过介质的折射率之差及其厚度,等于折射率与厚度的乘积之差(即光程之差)。而相差显微镜就是利用被检物的光程之差进行镜检的。
 
    相较相差,DIC 的主要优势为不必考虑相差环及聚光镜环的遮挡,可以实现高数值孔径的物镜观察。这意味着DIC 可以提高轴向分辨率,这在分辨率要求很高的试验中尤其有意义。
 

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